Under our culture conditions, mouse embryos from the BALB/c inbred mouse strain develop successfully in culture only from the late 2-cell stage onwards (so-called 2-cell block), whether or not EDTA is added to the culture medium. (CBA × C57BL) F2 embryos do not exhibit a 2-cell block. Medium conditioned by culture of non-blocking embryos from the 2-cell to the 8-cell stage did not improve the development of blocking embryos, nor did co-culture of blocking and non-blocking embryos, with or without conditioned medium. On the other hand phytohaemagglutinin (PHA)-assisted aggregation of an early 2-cell BALB/c embryo with five surrounding non-blocking F2 embryos (2-cell or 8-cell) or five BALB/c 8-cell embryos allowed the early 2-cell BALB/c embryos to develop into blastocysts within 72 h. Aggregation of blocking BALB/c 2-cell embryos with each other had no ‘rescue’ effect. When blocking and non-blocking 2-cell embryos were aggregated together, an integrated blastocyst was formed; but when the early 2-cell BALB/c embryos were aggregated with non-blocking 8-cell embryos, the blocking embryos formed a separate small blastocyst, which nonetheless retained adherent contact with the non-blocking embryos throughout the culture period. Ultrastructural analysis showed that 2-cell embryos aggregated with the aid of PHA form close adherent cell contacts up to several micrometres in length.

Introduction. This protocol describes a method for obtaining in vitro germination of zygotic embryos from open-pollinated wild seedy bananas and controlled hybridizations. The principle, key advantages, starting plant material, time required and expected results are presented. Materials and methods. This part describes the required laboratory materials, medium preparation, embryo extraction and culture. Results. Embryos typically begin germination in the dark about 15 days after inoculation on germinating medium. After 30––40 days of culture, plantlets are subcultured on a plant growth medium and placed in the light to achieve plant growth and rooting. The ratios of zygotic embryos obtained vary with the types of crosses achieved between Musa sp. genotypes.

Introduction. L’olivier (Olea europaea L.) est la principale espèce fruitière exploitée au Maroc. L’embryogenèse somatique de la Picholine marocaine a été jusqu’à présent très peu étudiée malgré l’importance de cette variété au Maroc. L’objectif de nos recherches a été d’étudier les effets de divers milieux de culture sur l’induction et le développement d’embryons somatiques chez cette variété. Matériel et méthodes. Des cotylédons entiers de graines d’olivier ont été excisés après désinfection et mis en culture. L’initiation des cals embryogènes a eu lieu sur un milieu de culture de Murashige et Skoog, solidifié par de l’agar et contenant 0,5 mg de zéatine·L–1 combinée à différentes concentrations en acide naphtalène acétique (ANA) [(1, 2, 5, 10 et 40) mg·L–1], les cultures témoins étant sans régulateurs de croissance. Après 3 semaines, les cals ont été transférés dans un milieu soit liquide, soit solidifié par de l’agar ou de la gélerite. Après 6 semaines sur le milieu d’induction, les cals ont été transférés sur un milieu maintenu liquide ou solidifié par de l’agar ou de la gélerite, et contenant 0,5 mg·L–1 de zéatine, afin de favoriser le développement des embryons somatiques et, par la suite, leur régénération en plantules. Le taux de cals induits et le poids moyens des cals formés sur les différents milieux ont été mesurés après 6 semaines de culture sur le milieu d’induction. Une analyse histologique des cals embryogènes et non embryogènes a été effectuée. Résultats. L’induction des cals a significativement été influencée par la concentration en ANA. Les meilleurs résultats ont été obtenus avec 2 mg ANA·L–1 pour l’induction des cals (82,3 %) et 5 mg ANA·L–1 pour le développement de ces cals (150 mg). Le milieu liquide s’est révélé être le meilleur pour l’induction des cals et le milieu avec agar a favorisé le développement des cals et la régénération de plantules par embryogenèse somatique. L’utilisation de la gélerite n’a permis aucune morphogenèse. Les plantules régénérées et acclimatées ont présenté une croissance normale en serre. Conclusion. L’embryogenèse somatique serait exploitable pour la micropropagation de l’olivier au Maroc.

Introduction. Les agrumes sont sensibles à la salinité. Notre étude a cherché à sélectionner, chez le citrange Troyer, des lignées cellulaires tolérantes à NaCl, à évaluer l’effet du sel sur la croissance des cals et à doser les solutés susceptibles d’être impliqués dans leur réponse au stress salin. Matériel et méthodes. Des cals ont été cultivés sur un milieu de culture contenant du NaCl dont la concentration a été augmentée progressivement jusqu’à atteindre 8 g NaCl·L–1. Ils ont ensuite été transférés sur un milieu sans NaCl pour tester leur indépendance vis-à-vis du sel, puis remis en présence de 8 g NaCl·L–1 pour tester leur stabilité. Des dosages de solutés (Na+, K+, proline et sucres solubles) contenus dans les cals ont été effectués à la fin de l’expérimentation. Résultats et discussion. La salinité a ralenti la croissance et provoqué le brunissement de la plupart des explants (cals sensibles). Les cals tolérants ont présenté une croissance comparable à celle des témoins. Le transfert de ces cals sur un milieu sans NaCl suivi de leur remise en culture sur milieu salin a démontré l’indépendance et la stabilité du caractère de tolérance sélectionné. La teneur en K+ des cals tolérants a été voisine de celle des cals témoins, mais plus élevée que celle des cals sensibles. En revanche, la teneur en ions Na+ des cals tolérants et sensibles a été relativement plus élevée que celle des témoins. Le sodium s’accumulerait donc à deux niveaux cellulaires selon le type de cals : envahissement du cytosol (effet toxique) pour les cals sensibles ou compartimentage vacuolaire pour les cals tolérants. La salinité a provoqué l’accumulation de proline et de sucres solubles dans les cals tolérants mais pas dans les cals sensibles. Conclusions. Des lignées cellulaires stables et tolérantes au NaCl ont été obtenues à partir d’embryons de citrange Troyer. Cette tolérance pourrait être liée à des changements dans les propriétés de transport des ions et dans la capacité de régulation et de compartimentage ionique. L’accumulation de solutés organiques constitue un caractère métabolique à valeur adaptative qui pourrait être un indicateur de tolérance au stress salin des cals.

Introduction. For the micropropagation of woody species, contamination of in vitro cultured explants is a constant problem, which can compromise the development of the technique. The aim of our study was to evaluate the effects of an antibiotic and a fungicide on surface and endophytic microorganisms associated with Annona cauliflora, A. bahiensis and A. glabra (Annonaceae) tissue culture. Materials and methods. Our work made it possible to compare a standard disinfection of in vitro cultured explants and the use of either a commercial fungicide, Benlate 500 (50% of benomyl) at (0.0, 1.0, 2.0 and 4.0) ${\rm g} \cdot {\rm L}^{-1}$, or an antibiotic, ampicillin at (0.0, 1.0, 2.0 and 4.0) ${\rm mg} \cdot {\rm L}^{-1}$. Results. The study revealed considerable variations in the infection rates within species and according to the concentrations of benomyl and ampicillin used. Benomyl was effective at cleaning leaf segments, and, at a concentration of 1.0 ${\rm g} \cdot {\rm L}^{-1}$, this fungicide was sufficient to eliminate all fungi. Ampicillin treatments at (0.0 to 4.0) ${\rm mg} \cdot {\rm L}^{-1}$ were ineffective at controlling bacterial contamination. Conclusion. Referring to the difficulty in obtaining an aseptic in vitro culture starting from a woody species, the average number of healthy explants obtained after the disinfection of foliar explants of Annona sp. using the antimicrobial substances tested was significant. Further studies to evaluate the effects of the concentration of chemicals on in vitro plant regeneration for Annona species are needed to clarify the relationship between the concentration and phytotoxic effect of chemicals.

Introduction. Jusqu'à présent, aucun protocole n'a été développé pour l'embryogenèse somatique de l'olivier Picholine, cultivar exploité dans près de 98 % des plantations d'oliviers au Maroc. Nos travaux ont donc cherché à étudier les effets de la composition du milieu de culture et de la lumière sur l'induction et le développement d'embryons somatiques chez ce cultivar. Matériel et méthodes. Après désinfection des noyaux d'olives Picholine, des cotylédons ont été mis en culture après suppression des embryons zygotiques. Ils ont été disposés en boîtes de Pétri soit entiers, soit en distinguant les parties proximales et distales. Pour la phase d'induction de cals embryogènes, quatre milieux de base [Murashige et Skoog (MS), Bourgin et Nitsch (BN), Schenk et Hildebrandt (SH) et Canas et Benbadis (OMc)], additionnés de régulateurs de croissance (zéatine et ANA), ont été testés soit à l'obscurité, soit en photopériode de 16 h. Après 6 semaines de culture sur ces milieux d'induction, les cals ont été transférés en tubes, dans des milieux de culture frais mais sans ANA et soumis à une photopériode de 16 h. À l'issue de cette phase, les plantules présentant des racines bien développées et au moins deux feuilles ont été repiquées dans des pots contenant un substrat et acclimatées en serre. Résultats. Les meilleurs résultats d'induction et de développement des embryons somatiques ont été obtenus avec le milieu MS et aucune morphogenèse n'a été observée sur le milieu OMc. L'incubation à la lumière a significativement réduit l'induction des cals embryogènes et a inhibé la régénération des plantules. Les parties proximales des cotylédons ont donné de meilleurs résultats que les parties distales. Le taux de régénération de plantules a atteint 40 % des explants mis en culture et le pourcentage de survie obtenu après leur acclimatation a atteint 94 %. Conclusion. Le protocole décrit a démontré la capacité embryogène du cultivar Picholine marocaine. Il pourra être exploité pour la propagation de cet olivier au Maroc.

Introduction. Cytokinins enhance axillary shoots, which helps prolific shoot multiplication in vitro. Very few reports are available on biochemical changes associated with this in vitro proliferation of Citrus. The present study was undertaken to find out the influence of two widely used cytokinins on various morphological and biochemical constituents of in vitro proliferated shoots of Citrus species. Materials and methods. Shoots of (0.5 to 1.0) cm long from in vitro proliferated shoots of five Citrus species were cultured on MS medium supplemented with eight increasing levels of benzylaminopurine (BAP) or kinetin spread from (0.25 to 2) mg$\cdot$L-1. After 6 weeks of culture, morphogenetic characters were observed, and shoot samples were crushed with 5 mL of hot ethanol; the extract collected was used for the estimation of reducing sugars, total phenols, ortho dihydric (OD) phenol, amino nitrogen and protein percentages. Results and discussion. For all the morphogenetic characters studied, except the shoot number, there were significant interactions between the Citrus species and the different concentrations of BAP and kinetine. Increased concentration of cytokinins reduced the amount of total phenol, OD phenol and total protein. Calamondin recorded the lowest percent of reducing sugar and protein. The maximum amount of reducing sugars was recorded for C. volkameriana. Supplementation of BAP resulted in the highest amount of total and OD phenols, whereas kinetin improved the reducing sugar and amino nitrogen.