Introduction. This protocol describes a method for obtaining protoplasts from banana leaves, calli and cell suspensions, and their sustainable development via somatic embryogenesis from embryogenic cell suspensions. The principle, key advantages, starting plant material, time required and expected results are presented. Materials and methods. This part describes the required laboratory materials, and media preparation for protoplast production and culture. Results. The first protoplasts may be seen after 30 min of incubation in enzyme maceration. With protoplasts from embryogenic cell suspension, complete development into a whole plant, through somatic embryogenesis, is observed in 12 weeks. The first cell divisions occur on feeder layers 3–8 days after protoplast plating. Proembryo formation is observed 14–21 days after initiation of protoplast culture. The transfer of derived embryo plantlets, at 8–10 weeks after protoplast plating, onto growth regulator-free medium, leads to plant rooting and elongation.

Introduction. Plant regeneration from in vitro culture of adult citrus tissue may help in early evaluation of important horticultural characteristics of genetic material from breeding programs, which incorporate biotechnological tools. Our research aimed to optimize in vitro culture conditions that could lead to the maximum plant regeneration through organogenesis of ‘Bahia’ sweet orange (Citrus sinensis L. Osbeck) in explants (internodes and foliar disc segments) collected from adult plants grown under greenhouse conditions. Materials and methods. Organogenesis was induced in internodes on DBA3 culture media supplemented with BAP at (0.0, 1.0, 2.0 and 3.0) mg·L–1 combined with NAA (0.5 mg·L–1), and in foliar discs on culture media with BAP at (0.0, 0.5, 1.0, 1.5 and 2.0) mg·L–1 combined or not with NAA (0.5 mg.L–1). Results and discussion. The concentrations of (1.0, 2.0 or 3.0) mg·L–1 of BAP combined with 0.5 mg·L–1 of NAA induced in vitro organogenesis in internodes of ‘Bahia’ sweet orange. The use of foliar discs was not efficient for adventitious organogenesis.

Introduction. Irvingia gabonensis (Irvingiaceae) est un arbre fruitier des forêts denses humides dont les fruits et le bois sont très exploités par les populations locales. Plante allogame, la multiplication par semis entraîne une grande hétérogénéité génétique. Les techniques de multiplication végétative traditionnelle donnent un faible taux de multiplication. Le but principal de ce travail a été de mettre au point une technique de multiplication conforme in vitro des individus élites. Matériel et méthodes. Les microboutures ont été prélevées sur un plant d'Irvingia gabonensis portant des fruits mûrs. Après désinfection, elles ont été ensuite mises en culture sur un milieu dérivé de Murashige et Skoog dilué 4 fois (MS/4). Les effets de la kinétine ont été étudiés sur le débourrement et le développement des bourgeons axillaires. Les effets de la benzylaminopurine (BAP) ont été étudiés sur la prolifération des bourgeons des microboutures. Enfin, les effets de l'acide naphtalène acétique (ANA) ont été étudiés sur l'enracinement des vitroplants. Résultats. La kinétine à 3 mg$\cdot$L-1 a favorisé le meilleur débourrement et le meilleur développement des bourgeons axillaires. La BAP à 4,5 mg$\cdot$L-1 a permis la prolifération de 95 % des bourgeons de microboutures avec un nombre maximal de 5,1 bourgeons débourrés par microbouture. L'ANA à 2,5 mg$\cdot$L-1 a permis l'enracinement de 100 % des vitroplants issus des microboutures avec un nombre maximal de 12,6 racines par vitroplant et de 98 % des vitroplants issus des bourgeons isolés avec un nombre maximal de 9,2 racines par vitroplant. L'acclimatation des vitroplants a réussi à 88 %. Discussion et conclusion. En utilisant la BAP, 260 plants enracinés en conditions horticoles peuvent être obtenus annuellement à partir de 64 explants sains. Les résultats de ce travail ouvrent ainsi une nouvelle voie pour la production conforme de plant d'I. gabonensis qui pourront être utilisés pour la propagation et la domestication de cette espèce.

Introduction. Jusqu'à présent, aucun protocole n'a été développé pour l'embryogenèse somatique de l'olivier Picholine, cultivar exploité dans près de 98 % des plantations d'oliviers au Maroc. Nos travaux ont donc cherché à étudier les effets de la composition du milieu de culture et de la lumière sur l'induction et le développement d'embryons somatiques chez ce cultivar. Matériel et méthodes. Après désinfection des noyaux d'olives Picholine, des cotylédons ont été mis en culture après suppression des embryons zygotiques. Ils ont été disposés en boîtes de Pétri soit entiers, soit en distinguant les parties proximales et distales. Pour la phase d'induction de cals embryogènes, quatre milieux de base [Murashige et Skoog (MS), Bourgin et Nitsch (BN), Schenk et Hildebrandt (SH) et Canas et Benbadis (OMc)], additionnés de régulateurs de croissance (zéatine et ANA), ont été testés soit à l'obscurité, soit en photopériode de 16 h. Après 6 semaines de culture sur ces milieux d'induction, les cals ont été transférés en tubes, dans des milieux de culture frais mais sans ANA et soumis à une photopériode de 16 h. À l'issue de cette phase, les plantules présentant des racines bien développées et au moins deux feuilles ont été repiquées dans des pots contenant un substrat et acclimatées en serre. Résultats. Les meilleurs résultats d'induction et de développement des embryons somatiques ont été obtenus avec le milieu MS et aucune morphogenèse n'a été observée sur le milieu OMc. L'incubation à la lumière a significativement réduit l'induction des cals embryogènes et a inhibé la régénération des plantules. Les parties proximales des cotylédons ont donné de meilleurs résultats que les parties distales. Le taux de régénération de plantules a atteint 40 % des explants mis en culture et le pourcentage de survie obtenu après leur acclimatation a atteint 94 %. Conclusion. Le protocole décrit a démontré la capacité embryogène du cultivar Picholine marocaine. Il pourra être exploité pour la propagation de cet olivier au Maroc.

Introduction. La plupart des travaux sur la multiplication in vitro de l'ananas ont utilisé des explants de diverses origines, mais peu font état de l'utilisation de couronnes pour l'obtention de plantules in vitro. Par ailleurs, la régénération de plants effectuée via la formation de cals est susceptible d'induire des variations somaclonales. De ce fait, une méthode de régénération directe in vitro à partir des couronnes a été testée. Matériel et méthodes. Après désinfection, des couronnes d'ananas de la variété cayenne ont été cultivées sur un milieu liquide de Murashige et Skoog dilué de moitié, contenant (2 à 10) mg BAP × L-1 ou (2 à 12) mg kinétine × L-1. L'induction des bourgeons axillaires a été observée après 14 j de culture et le nombre de plantules développées a été compté après 65 j. Certaines plantules ont alors été acclimatées sur un mélange de terre et vermiculite avant d'être transférées au champ. Résultats et discussion. Les meilleurs taux d'induction et de développement de plantules ont été obtenus avec 4 mg BAP × L-1 (en moyenne 6,7 plantules par couronne en 65 j) et 6 mg kinétine × L-1 (11,9 plantules par couronne). Les plantules acclimatées et transférées au champ ont survécu à 100 %. Conclusion. Le démarrage direct d'un nombre important de bourgeons axillaires de couronne grâce à l'utilisation d'une cytokinine constitue une technique intermédiaire entre les pratiques d'horticulture et la culture in vitro. Toutefois, la productivité des plants issus des plantules ainsi régénérées devra être évaluée comparativement à celle des plants obtenus de façon traditionnelle afin d'en tester les performances.

Introduction. Le safoutier (Dacryodes edulis, Burseraceae) est un arbre dont les fruits sont très appréciés par les populations de son aire de répartition. Plante allogame, la multiplication par semis ne permet pas d'effectuer une multiplication conforme de l'arbre sélectionné. La présente étude a eu pour principal objectif de mettre au point une technique de régénération in vitro des bourgeons axillaires et apex prélevés sur de jeunes plants issus de la germination de graines, afin d'adapter ultérieurement cette technique au clonage d'arbres adultes par utilisation de repousses formées après recépage. Matériel et méthodes. Des nœuds et apex prélevés sur des plants de Dacryodes edulis issus de la germination de graines ont été mis en culture in vitro sur un milieu Murashige et Skoog dilué de moitié (MS 1/2). Les effets du charbon actif et de la benzyleadéninepurine (BAP) sur le débourrement des explants ont été étudiés, de même que l'influence de l'acide naphtalènacétique (ANA) et de la photopériode sur l'enracinement. Résultats. Le milieu MS 1/2 additionné de charbon actif à 2g × L-1 et de BAP à 2,22 µM ou 4,44 µM a provoqué le meilleur débourrement des bourgeons axillaires et une bonne croissance des tigelles. L'ANA à 5,37 µM a favorisé l'enracinement. Une période de 7 j à l'obscurité s'est révélée favorable à l'induction racinaire. Deux types de racines ont été observés : les racines néoformées (issues de cals) et les racines adventives. L'acclimatation a été faite avec succès sur substrat constitué de tourbe et vermiculite. La régénération des vitroplants à partir des nœuds et apex permet de distinguer le long de la jeune plante un gradient morphogénétique acropétale. Discussion et conclusion. Ces résultats pourront être exploités pour la mise au point d'une micropropagation conforme à partir de jeunes repousses formées après la taille d'un safoutier présentant des caractéristiques intéressantes.