An ideal culture medium for Leishmania promastigotes should retain the basic characteristics of promastigotes found in sandflies (morphology and infectivity). Furthermore, the media should not create a bias in experimental settings, thus enabling the proper extrapolation of results. To assess this we studied several established media for promastigote growth. We analysed morphology, viability, cell cycle progression, metacyclic profile, capacity to differentiate into axenic amastigotes and infectivity. Furthermore, using a rational approach from the evaluated media we developed a simple serum-free medium (cRPMI). We report that parasites growing in different media present different biological characteristics and distinct in vitro and in vivo infectivities. The developed medium, cRPMI, proved to be a less expensive substitute for traditional serum-supplemented media for the in vitro maintenance of promastigotes. In fact, cRPMI is ideal for the maintenance of parasites in the laboratory, diminishing the expected loss of virulence over time typical of the parasite cultivation. Ultimately this report is a clear warning that the normalization of culture media should be a real concern in the field as media-specific phenomena are sufficient to induce biological bias with consequences in infectivity and general parasite biology.

Purpose: To compare the effects of four culture media on the quality of human zygotes and embryos. Methods: Prospective study analyzing 2289 human embryos cultivated simultaneously in two different culture media: HTF, the default medium, with either Universal IVF, Global or IVF-30 as the secondary media. The sibling oocytes by each patient were randomly divided between the two culture media following intracytoplasmic sperm injection (ICSI). On day 1 the pronuclear stage of zygotes were evaluated and on day 2 embryos were evaluated according to the number of cells, percentage of fragmentation and number of nuclei. Z-test and odds ratios were used in the statistical analysis. Results: There was a higher percentage (55.2%) of class A1 + A2 zygotes with IVF-30 compared with HTF, Global or Universal IVF media (49.1%, 44.7% and 44.2%, respectively). The percentage of Top embryos was significantly higher with Global (40.2%) compared with HTF (21.3%), IVF-30 (25.0%) or Universal IVF media (11.2%). Conclusions: Global medium produced more Top embryos evaluated on day 2 of development.

The objective of the present study was to evaluate the viability of frozen embryos obtained from various private farmers in a culture medium for 4 h. Forty-seven embryos were used that had been previously graded as good and fair. These embryos were evaluated using stereoscopic microscopy by experienced clinicians prior to freezing. Embryos were divided in two groups: the non-cultured group, made up of six good quality embryos, and five fair; and the cultured group that consisted of 20 good quality embryos and 16 fair. Fifty-four per cent of the good quality embryos achieved a favourable development during culture whereas just 42% of embryos determined to be fair were observed to have adequate development. This evaluation was undertaken by serial photographs obtained at the onset of culture and 4 h later. This finding was corroborated by a more specific technique: terminal deoxynucleotide transferase dUTP nick end labelling–bromodeoxyuridine (TUNEL–BrdU). These results are indicative of the necessity of tight quality controls for commercially produced frozen embryos, as once thawed it is unlikely that clinicians will examine them to determine their physiological status prior to transfer.

Dientamoeba fragilis is a pathogen of the human gastrointestinal tract that is a common cause of diarrhoea. A paucity of knowledge on the in vitro cultivation and cryopreservation of Dientamoeba has meant that few studies have been conducted to investigate its biology. The objective of this study was to define, for the first time, in vitro culture conditions able to support the long-term in vitro growth of Dientamoeba. Also, we aimed to define a suitable method for cryopreserving viable Dientamoeba trophozoites. A modified BD medium, TYGM-9, Loeffler's slope medium, Robinson's medium, Medium 199, Trichosel and a Tritrichomonas fetus medium were compared, using cell counts, for their ability to support the growth of D. fragilis at various temperatures and atmospheric conditions. Loeffler's slope medium supported significantly better growth compared to other media. A temperature of 42°C and a microaerophilic atmosphere were also optimum for Dientamoeba growth. To our knowledge, this is the first study to describe and compare different culture media and conditions for the growth of clinical isolates of D. fragilis. This new technology will aid the development of diagnostics for dientamoebiasis as well as facilitate large-scale sequencing projects that will fast track molecular studies on D. fragilis.

Introduction. This protocol describes a method for obtaining protoplasts from banana leaves, calli and cell suspensions, and their sustainable development via somatic embryogenesis from embryogenic cell suspensions. The principle, key advantages, starting plant material, time required and expected results are presented. Materials and methods. This part describes the required laboratory materials, and media preparation for protoplast production and culture. Results. The first protoplasts may be seen after 30 min of incubation in enzyme maceration. With protoplasts from embryogenic cell suspension, complete development into a whole plant, through somatic embryogenesis, is observed in 12 weeks. The first cell divisions occur on feeder layers 3–8 days after protoplast plating. Proembryo formation is observed 14–21 days after initiation of protoplast culture. The transfer of derived embryo plantlets, at 8–10 weeks after protoplast plating, onto growth regulator-free medium, leads to plant rooting and elongation.

Introduction. L’olivier (Olea europaea L.) est la principale espèce fruitière exploitée au Maroc. L’embryogenèse somatique de la Picholine marocaine a été jusqu’à présent très peu étudiée malgré l’importance de cette variété au Maroc. L’objectif de nos recherches a été d’étudier les effets de divers milieux de culture sur l’induction et le développement d’embryons somatiques chez cette variété. Matériel et méthodes. Des cotylédons entiers de graines d’olivier ont été excisés après désinfection et mis en culture. L’initiation des cals embryogènes a eu lieu sur un milieu de culture de Murashige et Skoog, solidifié par de l’agar et contenant 0,5 mg de zéatine·L–1 combinée à différentes concentrations en acide naphtalène acétique (ANA) [(1, 2, 5, 10 et 40) mg·L–1], les cultures témoins étant sans régulateurs de croissance. Après 3 semaines, les cals ont été transférés dans un milieu soit liquide, soit solidifié par de l’agar ou de la gélerite. Après 6 semaines sur le milieu d’induction, les cals ont été transférés sur un milieu maintenu liquide ou solidifié par de l’agar ou de la gélerite, et contenant 0,5 mg·L–1 de zéatine, afin de favoriser le développement des embryons somatiques et, par la suite, leur régénération en plantules. Le taux de cals induits et le poids moyens des cals formés sur les différents milieux ont été mesurés après 6 semaines de culture sur le milieu d’induction. Une analyse histologique des cals embryogènes et non embryogènes a été effectuée. Résultats. L’induction des cals a significativement été influencée par la concentration en ANA. Les meilleurs résultats ont été obtenus avec 2 mg ANA·L–1 pour l’induction des cals (82,3 %) et 5 mg ANA·L–1 pour le développement de ces cals (150 mg). Le milieu liquide s’est révélé être le meilleur pour l’induction des cals et le milieu avec agar a favorisé le développement des cals et la régénération de plantules par embryogenèse somatique. L’utilisation de la gélerite n’a permis aucune morphogenèse. Les plantules régénérées et acclimatées ont présenté une croissance normale en serre. Conclusion. L’embryogenèse somatique serait exploitable pour la micropropagation de l’olivier au Maroc.

Introduction. Plant regeneration from in vitro culture of adult citrus tissue may help in early evaluation of important horticultural characteristics of genetic material from breeding programs, which incorporate biotechnological tools. Our research aimed to optimize in vitro culture conditions that could lead to the maximum plant regeneration through organogenesis of ‘Bahia’ sweet orange (Citrus sinensis L. Osbeck) in explants (internodes and foliar disc segments) collected from adult plants grown under greenhouse conditions. Materials and methods. Organogenesis was induced in internodes on DBA3 culture media supplemented with BAP at (0.0, 1.0, 2.0 and 3.0) mg·L–1 combined with NAA (0.5 mg·L–1), and in foliar discs on culture media with BAP at (0.0, 0.5, 1.0, 1.5 and 2.0) mg·L–1 combined or not with NAA (0.5 mg.L–1). Results and discussion. The concentrations of (1.0, 2.0 or 3.0) mg·L–1 of BAP combined with 0.5 mg·L–1 of NAA induced in vitro organogenesis in internodes of ‘Bahia’ sweet orange. The use of foliar discs was not efficient for adventitious organogenesis.

Introduction. La propagation in vitro d’A. glabra L. non encore étudiée pourrait permettre de remédier à certaines difficultés de multiplication de cette espèce fruitière ligneuse. Des techniques de micropropagation ayant été déjà expérimentées avec succès avec d’autres espèces d’Annona (A. squamosa, A. cherimola, A. muricata), nous avons cherché à développer un système complet de micropropagation d’A. glabra L. en utilisant des explants de jeunes plantules. Matériel et méthodes. Pour la phase de prolifération de bourgeons axillaires (durée 30 jours), des boutures de segments nodaux prélevées sur la tige de jeunes plantes matrices ont été mises en culture dans un milieu de base MS supplémenté en différentes concentrations de BAP, utilisée seule ou en combinaison avec différentes concentrations d’ANA, et avec ou sans 1,0 mg de GA3·L–1. À l’issue de cette phase, le nombre moyen de tigelles obtenues par explant et leur taille moyenne ont été mesurés pour chacun des traitements. Pour l’enracinement des tigelles obtenues à l’issue de cette prolifération, diverses concentrations d’AIB et différents pH du milieu ont été testés (durée 15 jours). À la fin de cette phase, le nombre moyen de racines obtenues par tigelle et leur taille moyenne ont été évalués. L’acclimatation des microplants a ensuite été suivie en conditions contrôlées pendant 21 jours. Résultats et discussion. Tous les traitements, même ceux dépourvus de régulateurs de croissance, ont permis d’obtenir en moyenne 1,5 tigelles par segment nodal. Toutefois, les tigelles les plus développées ont été obtenues en utilisant 0,5 mg·L–1 de BAP utilisé seul. L’addition de 1,0 mg de GA3·L–1 au milieu de multiplication n’a pas été favorable au développement des tigelles. Durant l’expérimentation in vitro, une nécrose de l’extrémité des tigelles et une abscission foliaire ont pu être observées ; cela pourrait être lié à un déficit en calcium et à l’accumulation d’éthylène à l’intérieur du récipient de culture. Le pourcentage le plus élevé de boutures enracinées et le plus grand nombre de racines produites par explant ont été obtenus sans addition d’AIB au milieu de culture, en utilisant 4,0 mg·L–1 de charbon actif et un pH de 5,0. Les microplants avec racines ont été acclimatés avec succès.

Introduction. Jusqu'à présent, aucun protocole n'a été développé pour l'embryogenèse somatique de l'olivier Picholine, cultivar exploité dans près de 98 % des plantations d'oliviers au Maroc. Nos travaux ont donc cherché à étudier les effets de la composition du milieu de culture et de la lumière sur l'induction et le développement d'embryons somatiques chez ce cultivar. Matériel et méthodes. Après désinfection des noyaux d'olives Picholine, des cotylédons ont été mis en culture après suppression des embryons zygotiques. Ils ont été disposés en boîtes de Pétri soit entiers, soit en distinguant les parties proximales et distales. Pour la phase d'induction de cals embryogènes, quatre milieux de base [Murashige et Skoog (MS), Bourgin et Nitsch (BN), Schenk et Hildebrandt (SH) et Canas et Benbadis (OMc)], additionnés de régulateurs de croissance (zéatine et ANA), ont été testés soit à l'obscurité, soit en photopériode de 16 h. Après 6 semaines de culture sur ces milieux d'induction, les cals ont été transférés en tubes, dans des milieux de culture frais mais sans ANA et soumis à une photopériode de 16 h. À l'issue de cette phase, les plantules présentant des racines bien développées et au moins deux feuilles ont été repiquées dans des pots contenant un substrat et acclimatées en serre. Résultats. Les meilleurs résultats d'induction et de développement des embryons somatiques ont été obtenus avec le milieu MS et aucune morphogenèse n'a été observée sur le milieu OMc. L'incubation à la lumière a significativement réduit l'induction des cals embryogènes et a inhibé la régénération des plantules. Les parties proximales des cotylédons ont donné de meilleurs résultats que les parties distales. Le taux de régénération de plantules a atteint 40 % des explants mis en culture et le pourcentage de survie obtenu après leur acclimatation a atteint 94 %. Conclusion. Le protocole décrit a démontré la capacité embryogène du cultivar Picholine marocaine. Il pourra être exploité pour la propagation de cet olivier au Maroc.

Introduction. Le safoutier (Dacryodes edulis, Burseraceae) est un arbre dont les fruits sont très appréciés par les populations de son aire de répartition. Plante allogame, la multiplication par semis ne permet pas d'effectuer une multiplication conforme de l'arbre sélectionné. La présente étude a eu pour principal objectif de mettre au point une technique de régénération in vitro des bourgeons axillaires et apex prélevés sur de jeunes plants issus de la germination de graines, afin d'adapter ultérieurement cette technique au clonage d'arbres adultes par utilisation de repousses formées après recépage. Matériel et méthodes. Des nœuds et apex prélevés sur des plants de Dacryodes edulis issus de la germination de graines ont été mis en culture in vitro sur un milieu Murashige et Skoog dilué de moitié (MS 1/2). Les effets du charbon actif et de la benzyleadéninepurine (BAP) sur le débourrement des explants ont été étudiés, de même que l'influence de l'acide naphtalènacétique (ANA) et de la photopériode sur l'enracinement. Résultats. Le milieu MS 1/2 additionné de charbon actif à 2g × L-1 et de BAP à 2,22 µM ou 4,44 µM a provoqué le meilleur débourrement des bourgeons axillaires et une bonne croissance des tigelles. L'ANA à 5,37 µM a favorisé l'enracinement. Une période de 7 j à l'obscurité s'est révélée favorable à l'induction racinaire. Deux types de racines ont été observés : les racines néoformées (issues de cals) et les racines adventives. L'acclimatation a été faite avec succès sur substrat constitué de tourbe et vermiculite. La régénération des vitroplants à partir des nœuds et apex permet de distinguer le long de la jeune plante un gradient morphogénétique acropétale. Discussion et conclusion. Ces résultats pourront être exploités pour la mise au point d'une micropropagation conforme à partir de jeunes repousses formées après la taille d'un safoutier présentant des caractéristiques intéressantes.

Introduction. Although several pineapple micropropagation protocols have already been published, significant improvement could be achieved if the stages of the in vitro culture were better defined. Our work concerned several experiments aiming at the mass production of high quality plantlets. Materials and methods. Axillary buds were inoculated on an MS liquid culture medium added with NAA (2 μM) and BAP (4 μM). Regenerated shoots, divided into three classes of different sizes, were then used in further experiments. First, these shoots were inoculated in flasks containing the same MS culture medium with or without growth regulators. Then, four basic media, containing different salts and free from growth regulators were tested. In a third assay, the MS culture medium was compared with a half-diluted MS culture medium for studying the plantlet elongation and rooting stage. Results. In the MS culture medium supplemented with NAA and BAP, the highest multiplication rate (13.5 shoots) was obtained with the smallest shoots inoculated, while in the MS culture medium free of growth regulators, the highest plantlets (7.7 cm) were the result of the highest shoots inoculated and showed no vitrification. The normal MS culture medium, in comparison with the half-diluted one and the three other salt formulations, revealed a significant increase in the plantlet elongation and best general features. For acclimatization, the highest values of the survival rate (93.8% ) and fresh and dry weights were obtained with the transference of higher than 7.0 cm in vitro plantlets. Conclusion. Using the protocol described in this work, it is possible to obtain 1 million in vitro plantlets after 9 months from a single bud, with a 45 day subculture interval and an average multiplication rate of 10 shoots per bud.